简介：摘要目的探索外周血和组织样本检测结直肠癌大鼠Kirsten肉瘤病毒基因同源基因(KRAS)的一致性，评估其指导结直肠癌患者靶向治疗的价值。方法收集2015年1月至2021年8月江南大学附属医院451例结直肠癌患者的外周血及手术切除的肿瘤组织样本；外周血进行IAMB检测，组织样本同时进行组织IAMB法和Sanger测序。并选择其中44例样本同时进行外周血NGS检测和组织参比试剂盒检测。分析不同方法检测患者外周血和组织KRAS基因状态的一致性。同时收集患者的临床病理特征和靶向治疗相关随访数据。不同检测方法检测结果差异的比较使用配对样本McNemar检验；外周血和组织样本的一致性检验使用Kappa检验。结果IAMB法和Sanger测序法检测结直肠癌组织样本KRAS基因的突变率分别为47.9%(216/451)、45.2%(204/451)，IAMB法检测外周血中KRAS基因的突变率为39.0%(176/451)，外周血和组织IAMB法检测的阳性符合率、阴性符合率、总符合率分别为72.2%(156/216)、91.5%(215/235)、82.3%(371/451)。1例组织样本未检测到KRAS基因突变而外周血检测到KRAS基因突变的患者接受西妥昔单抗治疗2个月后即发生进展，其疗效低于文献中的中位无进展生存期。结论外周血IAMB法检测结直肠癌患者KRAS基因有助于结直肠癌患者个体化治疗辅助诊断。

简介：目的了解肺炎衣原体(TWAR)与心脏病的相关性，多方面探讨冠心病的发病因素。方法采用聚合酶链反应(PCR)法，对冠心病100例，高血压病40例，心肌疾病40例，心律失常40例，正常对照60例，血清TWARDNA进行检测。结果不同组别间TWAR阳性率的差别有高度显著性(χ2＝30.52，P＜0.05)，其中冠心病占31.0%，心肌疾病占32.5%，高血压7.5%，心律失常12.5%，正常对照1.67%，提示冠心病和心肌疾病TWAR阳性率较高。结论冠心病、心肌疾病TWAR阳性检出率比高血压，无临床心脏病证据的心律失常和正常对照组高，提示TWAR是引起冠心病和心肌疾病的原因之一。

简介：摘要目的研究聚合酶链反应检验法在阴道炎患者阴道细菌检验中的应用价值。方法我院2017年5月到2018年6月期间收治的细菌性阴道炎患者100例，分别对患者进行聚合酶链反应检验法检验和细菌培养法检验，比较两种检验方式的细菌阳性检出率，并比较两种检验方式的不同细菌检出率。结果聚合酶链反应检验法的细菌阳性检出率明显高于细菌培养法，数据对比P＜0.05。聚合酶链反应检验法对加特纳菌的检出率高于细菌培养法，数据对比P＜0.05。结论聚合酶链反应检验法在阴道炎患者阴道细菌检查中的应用效果较好，能有效提升阳性检出率，具有较高临床价值。

简介：摘要目的评估细菌培养、聚合酶链反应(PCR)和血清抗百日咳毒素免疫球蛋白G(AntiPT-IgG)水平检测对疑诊百日咳的辅助诊断价值。方法将2018年6月至2019年5月芜湖市第一人民医院儿科收治的110例百日咳疑似病例作为研究对象，采集鼻咽拭子进行百日咳鲍特菌培养及其特异核酸PCR检测，其中78例留取血清标本，以酶联免疫吸附试验检测AntiPT-IgG水平。结果细菌培养与PCR组阳性率分别为21.8%和30.0%，2组比较差异无统计学意义(χ2＝1.198，P>0.05)。咳嗽病程<2周病例细菌培养阳性率为32.1%，明显高于2～4周(14.3%)与>4周(9.1%)病例(χ2＝6.522，P<0.05)。<2周病例PCR阳性率(39.6%)也明显高于咳嗽2～4周(25.7%)、>4周病例(13.6%)(χ2＝6.126，P<0.05)。78例患儿血清AntiPT-IgG水平为(75.727±78.454) IU/mL，其中<2周和2～4周AntiPT-IgG水平的中位数分别为5.909 IU/mL和20.948 IU/mL，阳性率分别为14.7%和38.1%。>4周和恢复期AntiPT-IgG水平分别为(79.281±68.254) IU/mL、(107.242±75.750) IU/mL，阳性率分别为39.1%、57.1%。结论疫苗时代，应综合病原学和血清学检测结果辅助临床诊断百日咳。咳嗽病程<2周可疑患儿细菌培养和特异核酸的病原检测阳性率高，咳嗽病程4周后血清学检测辅助诊断更为有效。

简介：摘要目的分析产前诊断病例中染色体核型分析和荧光定量聚合酶链反应（quantitative fluorescent-polymerase chain reaction, QF-PCR）结果的一致性。方法回顾性分析2010年1月至2017年12月广州市妇女儿童医疗中心产前诊断门诊同时完成染色体核型分析及QF-PCR检测的10 967例病例的临床资料。分析染色体核型分析和QF-PCR的检测成功率、染色体核型正常及异常的检测一致率，以及2种方法对常见染色体病（21、18、13-三体及性染色体病）的检测一致率。采用受试者工作特性（receiver operative characteristic, ROC）曲线分析QF-PCR检测染色体病嵌合体的灵敏度和特异度。结果（1）10 967例产前诊断标本中，染色体核型分析培养失败率为0.99%（109/10 967），而QF-PCR的总检测失败率为0.10%（11/10 967）。（2）在培养成功的10 858例产前诊断标本中，9 960例（91.73%）染色体核型结果正常，此时QF-PCR与染色体核型分析的检测一致率为99.89%（9 949/9 960）。染色体核型异常病例共898例（8.19%），其中常见染色体异常（包括21-、18-、13-三体和性染色体异常）病例共694例（77.28%），其他染色体异常204例（22.72%）。QF-PCR与染色体核型分析的检测一致率为95.68%（664/694）。（3）染色体核型分析与QF-PCR检测21-、18-和13-三体和性染色体异常的一致率分别为99.74%（382/383）、100.00%（125/125）、100.00%（33/33）和81.05%（124/153），而分析常见染色体异常嵌合体的一致率为44.44%（24/54）。（4）QF-PCR对于染色体嵌合比例 >18.5%的病例的检出灵敏度为0.958（95%CI：0.789~0.999），特异度为0.600（95%CI：0.406~0.773），曲线下面积为0.811（95%CI：0.696~0.926），P<0.001。（5）对染色体核型提示嵌合而QF-PCR阴性的30例随访发现，10例（33.3%）选择引产，2例（6.7%）失访，18例（60.0%）子代出生后健康存活。结论在产前诊断病例中，QF-PCR和染色体核型分析技术对21-、18-、13-三体的检测一致率均较高，而对于性染色体的检测结果差异较大。

简介：背景：皮肤利什曼病（CL）很久前就在库库罗瓦地区被报道过。作者比较了采用显微镜和皮损抽取培养的传统诊断方法与采用来源于皮损的寄生虫特异性DNA进行聚合酶链反应（PCR）扩增的诊断方法的敏感性。方法：标本（n=25）来源于在地区皮肤病诊所临床诊断的CL患者。部分标本Giemsa染色并行镜检，并用Novy—Nicolle—McNeal（NNN）血琼脂培养基培养体前鞭毛生长。其他标本用于提取DNA，PCR扩增动基体微环DNA保守区。琼脂糖凝胶电泳后溴化乙锭染色，观察到预期大小（120bp）的PCR产物。结果：25份标本培养、显微镜检查、PCR检测的阳性率分别是44％、68％和100％。

简介：摘要DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。随着科学技术以及经济的发展，微生物的检验准确性在临床和生活健康以及饮食上都有着不可忽视的作用。本研究主要通过对聚合酶链式反应进行介绍，针对其特点深入研究其在微生物检验中的应用。

简介：【摘要】目的 分析在细菌类微生物污染细胞培养液中使用聚合酶联反应快速检测的效果。方法 选取2020年1月-12月哈尔滨市某院三级医院内200个细胞株（被人为污染的海拉细胞系）进行本次研究，全用PCR快速检测，统计检测有效率。结果 统计后，共出现40个细胞株的扩增片段，检测有效率能达到20.00%，可凸显出PCR扩增的灵敏度。结论 使用PCR快速检测能较快速的分析细胞培养中出现污染的细菌类微生物情况，检测敏锐度和有效性明显，能为早期检测污染提供帮助，值得使用。

简介：摘要目的研究比较免疫荧光与聚合酶链(PCR)法在淋球菌感染的临床应用价值。方法随机选取本院自2009年至2012年就诊的淋球菌感染的尿道炎患者126名，分为两组，观察组采用免疫荧光定量与PCR法，对照组则采用常规涂片染色法，进行比较两组的阳性检出率。结果126名患者中，免疫荧光PCR法62例的阳性检出率为85.5%；涂片法64阳性检出率为54.7%，免疫荧光PCR法的阳性检出率明显高于常规涂片法。结论免疫荧光PCR法优于图片染色法，并具有敏感性强，快速、特异性高等特点1，在临床诊断上有显著效果，对临床诊断与治疗有着重要的指导意义。

简介：

简介：目的：建立实时定量检测口腔内变形链球菌的实时定量聚合酶螺旋反应（PSR）方法。方法：针对变形链球菌的gtfB基因设计4套引物，通过实时浊度法和显色法两种方法判断结果。结果：从4套引物中筛选出最佳引物，并确定最佳温度为65％；进一步实验表明采用最佳引物能特异性地检测变形链球菌，与13种其他病原核酸无交叉反应，敏感性达10拷贝／μL。结论：建立了实时定量检测变形链球菌的PSR方法，该方法具有简单快速、特异性强、敏感性高的特点，为实时定量检测变形链球菌提供了新技术。

简介：摘要目的建立一种灵敏、特异的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)，用于快速、准确地检测西藏环状病毒(Tibet orbivirus, TIBOV)。方法收集GenBank数据库中全部TIBOV基因序列，利用Clustal X 2.1软件进行比对，根据分析结果选择TIBOV VP4基因保守区域设计特异性引物、探针；以体外转录的RNA为标准品，建立检测TIBOV的TaqMan RT-PCR方法，绘制荧光定量标准曲线；对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评价。结果引物与探针具有良好的特异性，对多种虫媒病毒无交叉反应。检测反应灵敏度为1.0×102拷贝/反应，在1.0×102～8拷贝/反应模板范围内具有良好的扩增曲线，同一样品重复检测循环阈值(Ct)的变异系数均小于1.5%。对西藏自治区、云南省、湖南省和广东省采集的蚊虫样本进行筛查，结果均为阴性。TIBOV模拟样本检出率为100%。结论该方法灵敏度高、特异性强，可用于TIBOV的常规监测。

简介：目的：利用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ—RT—PCR)检测强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞白细胞介素-2受体α(IL-2Rα)mRNA的表达水平，并进行疾病的活动性相关分析。方法：用PrimerExpressv2．0软件，根据GenBank提供的序列，在人IL-2RαmRNA的第2和第3外显子之间设计一对引物和一条TaqMan探针。提取总RNA，加入已优化的一步法FQ—RT—PCR反应体系，扩增产物经凝胶电泳后切胶回收，并与pUCm—T载体连接。制备好的重组质粒转化感受态细胞进行克隆。经测序分析确定为特异性片段后，用T7RNA聚合酶转录为cRNA，作为FQ—RT—PCR系列浓度标准品。评价FQ—RT—PCR检测IL-2RαmRNA的特异性、线性、精密度和探针稳定性等。定量测定HLA—B27阳性活动组与阴性非活动组强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞IL-2RαmRNA基因的表达水平，结合血浆可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)浓度，探讨与炎症活动的相互关系。结果：成功构建了cRNA标准品。该方法的线性范围为7～107cells／ml，其批内CV8．4％，批间CV9．6％；扩增产物克隆的双向测序结果经BLAST比较、分析，证实为IL-2RαmRNA特异性片段。对各30例HLA—B27阳性与阴性的强直性脊柱炎的测定表明：与正常人对照组结果比较，HLA—B27阳性组与HLA—B27阴性组IL-2RαmRNA和sIL-2R都有明显增加(P<0．01)。IL-2RαmRNA对炎症活动评价的灵敏度为96．7％。结论：FQ—RT—PCR具有灵敏、特异、结果重复性好等优点；IL-2RαmRNA与sIL-2R比较更能反映强直性脊柱炎患者的免疫状态，可能为免疫药物的疗效评价和药物筛选提供基因表达水平上的信息。

简介：摘要本文主要是聚合酶链式反应（PCR技术）进行了相关概述，然后就该技术在微生物检测中的具体应用进行了分析，最后提出了该技术在实际应用过程中所存在的问题以及具体的解决方式，希望能够以此来进一步提高聚合酶链式反应在微生物检测中的价值。

简介：

简介：

简介：摘要目的探讨荧光定量聚合酶链式反应(QF-PCR)在快速产前诊断中的临床应用价值。方法应用QF-PCR技术对2018年5月7日至2019年5月7日于扬州市妇幼保健院产前诊断中心行产前诊断的1 190例产前羊水样本进行13、18、21、X及Y的非整倍体产前诊断并与核型分析结果对比。结果1 190例羊水QF-PCR共诊断出33例各种染色体异常，包括21-三体20例；18-三体4例及性染色体异常9例。结论作为常见的快速诊断方法，QF-PCR诊断结果快速、准确，但还不能完全代替传统的核型分析。

简介：摘要目的探讨微滴式数字聚合酶链反应（ddPCR）在检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血循环肿瘤DNA（ctDNA）中表皮生长因子受体（EGFR）突变的应用价值。方法收集山西省肿瘤医院2018年8月至2019年3月就诊的63例NSCLC患者外周血标本，采用ddPCR检测患者外周血EGFR敏感突变，并与对应组织扩增阻滞突变系统PCR（ARMS-PCR）检测结果比较。采用Kappa检验对两种检测方法一致性进行分析。结果63例患者中，ddPCR共检测到EGFR敏感突变31例（49.2%），包括第18号外显子G719X突变1例（1.6%）、第19号外显子缺失（E19-Del）12例（19.0%）、第20号外显子T790M突变（T790M）11例（17.5%）、第21号外显子L858R突变（L858R）7例（11.1%）；31例突变患者中7例（22.6%）为双突变。ARMS-PCR检出上述4种突变26例（41.3%），依次有0例、12例（19.0%）、6例（9.5%）、8例（12.7%）；26例突变患者中双突变5例（19.2%）。1例患者ARMS-PCR检测L858R阳性而ddPCR检测L858R阴性。两种检测方法一致率为90.3%（κ=0.8，P<0.05）。31例ddPCR检测突变患者外周血ctDNA EGFR突变中位丰度1.7%（0.04%~23.60%），其中E19-Del中位丰度为2.5%（0.35%~22.70%），T790M突变中位丰度为0.6%（0.04%~14.00%），L858R突变中位丰度为2.3%（0.20%~23.60%）；ddPCR检测EGFR基因突变丰度<1%者10例，占所有突变者的32.6%（10/31），ARMS-PCR仅检出其中5例。接受酪氨酸激酶抑制剂（TKI）治疗且发生获得性耐药的19例患者中，ddPCR检出T790M突变11例（57.9%），而无TKI用药史患者均未检测出此突变。11例T790M突变患者中，突变丰度<0.1%者1例，0.1%~2.0%者7例，>2.0%者3例。结论ddPCR检测NSCLC患者外周血ctDNA中EGFR基因突变无创、快捷、灵敏度高且可绝对定量，为取样困难或因获得性耐药需重复取样肺癌患者进行EGFR-TKI靶向治疗提供了一个新的检测途径，个体化靶向治疗提供重要依据。

简介：

简介：摘要重组酶聚合酶扩增（RPA）技术是一种新型核酸恒温扩增检测技术。该技术可以在37~42 ℃条件下实现待测靶标的快速检测。它具有反应灵敏度高、特异性强、对仪器依赖程度低且可整合多种检测模式等优点，特别适用于基层和现场即时检测。本文从RPA技术的基础理论和实验要点出发概述了开展该项研究需要注意的要点，综述了RPA技术在医学检验领域的应用现状和相关问题，并展望了其未来发展的广泛前景。